主营:实验试剂;Elisa试剂盒;试剂盒;培养基;血清;抗体;生物试剂;实验室仪器等;氨基酸类;低温恒温槽;雪花制冰机;恒温油槽;等产品的国内一流服务商。欢迎您来电洽谈。电话:021-60526763
产品搜索:
 
|
|
|
|
|
|
|
|
硫酸多粘菌素B/多胜菌素乙
硫酸多粘菌素B/多胜菌素乙
氯霉素HE10001
氯霉素HE10001
L-茶氨酸3081-61-6
L-茶氨酸3081-61-6
1-萘甲胺118-31-0
1-萘甲胺118-31-0
多粘菌素E/硫酸粘菌素
多粘菌素E/硫酸粘菌素
不锈蒸馏水器
不锈蒸馏水器
七水硫酸镁/铁精矿/Magnesium sulfate heptahydrate
七水硫酸镁/铁精矿/Magnesium sulfate heptahydrate
生化培养箱
生化培养箱
二聚氰/二聚氰胺/氰基胍/二氰二氨/Dicyandiamide
二聚氰/二聚氰胺/氰基胍/二氰二氨/Dicyandiamide
乳化剂S-80/斯盘80/(Z)-单-9-十八烯酸脱水山梨醇酯/Span 80
乳化剂S-80/斯盘80/(Z)-单-9-十八烯酸脱水山梨醇酯/Span 80
山梨糖醇酐硬脂酸酯/司本60/乳化剂S-60/斯盘60/山梨醇酐单硬脂酸酯/清凉茶醇一硬脂酸酯/Sp
山梨糖醇酐硬脂酸酯/司本60/乳化剂S-60/斯盘60/山梨醇酐单硬脂酸酯/清凉茶醇一硬脂酸酯/Sp
CG-50弱酸型阳离子交换树脂/Amberlite CG-50
CG-50弱酸型阳离子交换树脂/Amberlite CG-50
生化试剂
电热套
分析检测仪器
万用可调电炉/封闭式电炉
混合器系列
电阻炉系列
蒸馏水器系列
电热板系列
匀浆机系列
离心机系列
* 振荡器系列
培养箱系列
磁力搅拌器
超声波清洗机
干燥箱
旋转蒸发器
糖度计,折光仪
冷冻干燥机
层析冷柜
低温恒温槽
2-乙烯基吡啶100-69-6质检报告COA
虫草素标准品73-03-0质检报告COA
1,1,2-三氯三氟乙烷76-13-1检验报告COA
4-乙酰氧基苯乙烯CAS:2628-16-2检测报告
二甲苯麝香CAS号:81-15-2质检报告COA
上海一基实业有限公司 >>> 技术文章
技术文章

黄曲霉素试剂盒使用说明书

点击次数:992 发布时间:2016-06-12

 

黄曲霉素(AF)酶联免疫分析(ELISA

 

 

试剂盒使用说明书

 

 

本试剂盒仅供研究使用。

 

1 使用目的:

 

本试剂盒用于检测饲料和谷物中黄曲霉素(AF)含量。

 

2 实验原理

 

本试剂盒采用直接竞争 ELISA 方法,在微孔板包被有黄曲霉素(AF)偶联抗原,加入黄曲霉素(AF)标准品或样品,游离黄曲霉素(AF)与微孔条上预包被的黄曲霉素偶联抗原互相竞争抗黄曲霉素(AF)抗体酶标记物,用 TMB 底物显色,加入终止液后颜色由蓝色变为黄色,用酶标仪在 450nm 波长下进行检测,吸光值与样品中黄曲霉素(AF)含量成反比,通过标准曲线计算样品中黄曲霉素(AF)的含量。

 

3 试剂盒组成

 

  • 预包被的黄曲霉素(AF)偶联抗原的可拆酶标板:1 块(12 孔×4 条)。

 

  • 黄曲霉素(AF)标准品:6 瓶(1ml/瓶),含量分别是: 0 ng/ml0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1 ng/ml

 

  • AF 抗体酶结合物:1 瓶(3ml)。

 

  • 显色液 A1 瓶(3ml)。

 

  • 显色液 B1 瓶(3ml)。

 

  • 终止液:1 瓶(3ml),2M 硫酸。

 

  • 样本稀释液:1 瓶(10×,   3ml),用于样品稀释用。

 

  • 浓缩洗涤液:1 瓶(20×20ml),用于洗板。

 

  • 说明书一份。

 

  • 需要而未提供的材料

 

4.1 设备

 

4.1.1波长450nm酶标仪。4.1.2粉碎机。4.1.3量筒。4.1.4振荡器。4.1.5漏斗。

 

4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。

 

4.1.7微量移液器。

 

4.2 试剂

 

4.2.1去离子水或蒸馏水。

 

4.2.2 甲醇。

 

  • 贮存

 

  • 试剂盒贮存于2~8℃,切勿冷冻

 

  • 未用完的微孔板应该密封干燥保存

 

6 注意事项

 

  • 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。

 

  • 不要使用过期试剂盒。

 

 

1

 

 

  • 试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(25±2℃),建议至少回温2小时。

 

  • 标准品中含有黄曲霉素(AF),使用时应特别注意,操作时应带手套。

 

  • 终止液中含有硫酸,使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。

 

  • 不同标准品、样品所用吸头不能混用,否则会影响试验结果。

 

  • 不同批号试剂盒中的试剂不得混用;不同标准品、样品所用吸头不得混用,否则会影响实验结果。
  • 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液,否则会影响实验结果

 

  • 混合试剂时应避免起泡。

 

7 工作液准备

 

7.1黄曲霉素(AF)标准品溶液:0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml

 

  • 浓缩洗涤液:用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用

 

  • 样本稀释液:用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用

 

  • 显色剂:已备用,避免光线直照

 

  • 反应终止液:已备用

 

8 样品处理程序(样品在提取过程中,要严格按说明书操作,提取过程中应准确稀释,否则

 

会出现结果不准确,样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存)

 

8.110g粉碎的样品,加 20ml 70%甲醇溶液

 

8.2强力振荡3分钟

 

8.3Whatman No 1滤纸过滤

 

8.425µl处理后的样品,加入25µl样本稀释液于反应孔中(样本稀释倍数为2

 

9 酶免分析步骤

 

9.1 实验须知

 

  • 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温(25±2℃),时间约2小时。回温至室温(25±2℃)后再取出微孔条,多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存注:一定保证回温充分,否则影响检测的度和准确度。
  • 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存

 

  • 请不要改变分析程序

 

  • 请使用的微量移液器

 

  • 操作一旦开始,请不要中断任何程序

 

  • ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序,请严格按照要求操作

 

  • 为避免交叉污染,每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样

 

  • 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面

 

9.2 分析步骤

 

  • 预先进行编号,标记B0、标准品和样品的位置,推荐进行双孔检测

 

  • 取所需数量的微孔(微孔条可拆),将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存

 

  • 样品稀释液(10×)、浓缩洗涤液(20×)稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)

 

  • B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml标准品溶液

 

  • 在各标准孔中加入50µl的标准品溶液

 

  • 在各样品孔中加入50µl样品溶液

 

  • 在所有孔中加入50µl的抗黄曲霉素(AF)抗体酶结合物

 

  • 轻轻晃动反应板几秒钟。

 

9.3 37℃温浴30min (温浴过程中不时轻拍反应板,可以减少双孔误差)

 

9.3.1 甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板5次,zui后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。

 

 

 

2

 

 

9.4 反应

 

  • 洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl显色液A,再加 50µl显色液B;轻微晃动反应板使之彻底混匀

 

  • 37℃温浴10min

 

  • 每孔中加入50µl终止液,混匀

 

  • 450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。

 

10 结果计算

 

10.1定量分析

 

10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以*个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。

 

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B0—0µg/L标准溶液的平均吸光度值

 

10.1.2以黄曲霉素(AF)浓度的对数值为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值,可从曲线上得到对应点的横坐标,即为黄曲霉素(AF)浓度的对数值,求得反对数即为测定液中黄曲霉素(AF)浓度Cng/ml10.1.3由于样品经过了预先稀释,因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释

 

倍数。

 

10.2 半定量测定

 

10.1.1目测半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品吸光

 

度值的高低比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

 

10.1.2仪器半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品颜色

 

深浅比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

 

11 特异性

 

物质 交叉反应

 

黄曲霉素B1 100% 黄曲霉素B2 80% 黄曲霉素G1 75% 黄曲霉素G2 30%

 

12 试剂盒参数

 

本试剂盒检测下限为0.1ppb B0吸光度zui佳值应大于1.0

 

试剂盒吸光度板内误差小于8%,板间误差小于15%。用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80%。

13 标准曲线模式(仅供参考)

 

线 0.1ng/ml~8.1ng/ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

14 分析限制

 

本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLCGC/MS加以确证。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

黄曲霉素(AF)酶联免疫分析(ELISA

 

 

试剂盒使用说明书

 

 

本试剂盒仅供研究使用。

 

1 使用目的:

 

本试剂盒用于检测饲料和谷物中黄曲霉素(AF)含量。

 

2 实验原理

 

本试剂盒采用直接竞争 ELISA 方法,在微孔板包被有黄曲霉素(AF)偶联抗原,加入黄曲霉素(AF)标准品或样品,游离黄曲霉素(AF)与微孔条上预包被的黄曲霉素偶联抗原互相竞争抗黄曲霉素(AF)抗体酶标记物,用 TMB 底物显色,加入终止液后颜色由蓝色变为黄色,用酶标仪在 450nm 波长下进行检测,吸光值与样品中黄曲霉素(AF)含量成反比,通过标准曲线计算样品中黄曲霉素(AF)的含量。

 

3 试剂盒组成

 

  • 预包被的黄曲霉素(AF)偶联抗原的可拆酶标板:1 块(12 孔×4 条)。

 

  • 黄曲霉素(AF)标准品:6 瓶(1ml/瓶),含量分别是: 0 ng/ml0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1 ng/ml

 

  • AF 抗体酶结合物:1 瓶(3ml)。

 

  • 显色液 A1 瓶(3ml)。

 

  • 显色液 B1 瓶(3ml)。

 

  • 终止液:1 瓶(3ml),2M 硫酸。

 

  • 样本稀释液:1 瓶(10×,   3ml),用于样品稀释用。

 

  • 浓缩洗涤液:1 瓶(20×20ml),用于洗板。

 

  • 说明书一份。

 

  • 需要而未提供的材料

 

4.1 设备

 

4.1.1波长450nm酶标仪。4.1.2粉碎机。4.1.3量筒。4.1.4振荡器。4.1.5漏斗。

 

4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。

 

4.1.7微量移液器。

 

4.2 试剂

 

4.2.1去离子水或蒸馏水。

 

4.2.2 甲醇。

 

  • 贮存

 

  • 试剂盒贮存于2~8℃,切勿冷冻

 

  • 未用完的微孔板应该密封干燥保存

 

6 注意事项

 

  • 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。

 

  • 不要使用过期试剂盒。

 

 

1

 

 

  • 试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(25±2℃),建议至少回温2小时。

 

  • 标准品中含有黄曲霉素(AF),使用时应特别注意,操作时应带手套。

 

  • 终止液中含有硫酸,使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。

 

  • 不同标准品、样品所用吸头不能混用,否则会影响试验结果。

 

  • 不同批号试剂盒中的试剂不得混用;不同标准品、样品所用吸头不得混用,否则会影响实验结果。
  • 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液,否则会影响实验结果

 

  • 混合试剂时应避免起泡。

 

7 工作液准备

 

7.1黄曲霉素(AF)标准品溶液:0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml

 

  • 浓缩洗涤液:用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用

 

  • 样本稀释液:用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用

 

  • 显色剂:已备用,避免光线直照

 

  • 反应终止液:已备用

 

8 样品处理程序(样品在提取过程中,要严格按说明书操作,提取过程中应准确稀释,否则

 

会出现结果不准确,样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存)

 

8.110g粉碎的样品,加 20ml 70%甲醇溶液

 

8.2强力振荡3分钟

 

8.3Whatman No 1滤纸过滤

 

8.425µl处理后的样品,加入25µl样本稀释液于反应孔中(样本稀释倍数为2

 

9 酶免分析步骤

 

9.1 实验须知

 

  • 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温(25±2℃),时间约2小时。回温至室温(25±2℃)后再取出微孔条,多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存注:一定保证回温充分,否则影响检测的度和准确度。
  • 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存

 

  • 请不要改变分析程序

 

  • 请使用的微量移液器

 

  • 操作一旦开始,请不要中断任何程序

 

  • ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序,请严格按照要求操作

 

  • 为避免交叉污染,每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样

 

  • 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面

 

9.2 分析步骤

 

  • 预先进行编号,标记B0、标准品和样品的位置,推荐进行双孔检测

 

  • 取所需数量的微孔(微孔条可拆),将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存

 

  • 样品稀释液(10×)、浓缩洗涤液(20×)稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)

 

  • B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml标准品溶液

 

  • 在各标准孔中加入50µl的标准品溶液

 

  • 在各样品孔中加入50µl样品溶液

 

  • 在所有孔中加入50µl的抗黄曲霉素(AF)抗体酶结合物

 

  • 轻轻晃动反应板几秒钟。

 

9.3 37℃温浴30min (温浴过程中不时轻拍反应板,可以减少双孔误差)

 

9.3.1 甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板5次,zui后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。

 

 

 

2

 

 

9.4 反应

 

  • 洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl显色液A,再加 50µl显色液B;轻微晃动反应板使之彻底混匀

 

  • 37℃温浴10min

 

  • 每孔中加入50µl终止液,混匀

 

  • 450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。

 

10 结果计算

 

10.1定量分析

 

10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以*个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。

 

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B0—0µg/L标准溶液的平均吸光度值

 

10.1.2以黄曲霉素(AF)浓度的对数值为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值,可从曲线上得到对应点的横坐标,即为黄曲霉素(AF)浓度的对数值,求得反对数即为测定液中黄曲霉素(AF)浓度Cng/ml10.1.3由于样品经过了预先稀释,因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释

 

倍数。

 

10.2 半定量测定

 

10.1.1目测半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品吸光

 

度值的高低比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

 

10.1.2仪器半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品颜色

 

深浅比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

 

11 特异性

 

物质 交叉反应

 

黄曲霉素B1 100% 黄曲霉素B2 80% 黄曲霉素G1 75% 黄曲霉素G2 30%

 

12 试剂盒参数

 

本试剂盒检测下限为0.1ppb B0吸光度zui佳值应大于1.0

 

试剂盒吸光度板内误差小于8%,板间误差小于15%。用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80%。

13 标准曲线模式(仅供参考)

 

线 0.1ng/ml~8.1ng/ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

14 分析限制

 

本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLCGC/MS加以确证。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
公司名称:上海一基实业有限公司 公司地址:上海浦东新区张杨北路5972号 邮政编码:200137 
联系人:张嘉彬 联系电话:021-60526763  传真号码:021-50190009 公司网址:www.yijisy.com
网站访问统计:263982 网站ICP备案号:沪ICP备17026694号-4  GoogleSiteMap  网后台登录地址
主营:实验试剂;Elisa试剂盒;试剂盒;培养基;血清;抗体;生物试剂;实验室仪器等;氨基酸类;低温恒温槽;雪花制冰机;恒温油槽; 等产品

化工仪器网

中级会员

中级会员

9

推荐收藏该企业网站