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M199基础培养基的配制步骤

点击次数:4227 发布时间:2014-11-03

M199基础培养基是 Morgan 等在 1950 年zui早开发的一种化学成份明确的基础培养基,zui早用于鸡胚心细胞的培养。目前在补充了血清后可用于病毒及疫苗的生产,也用于多种非转化的动物细胞生长。  

高压灭菌型是该培养基的热稳定配方,可保证其营养成份在高压高热中不受影响。该配方中不含L-谷氨酰胺及碳酸氢钠,需在高温灭菌后添加。  

产品型号  

M199基础培养基,含 L-谷氨酰胺,不含碳酸氢钠  

M199基础培养基,不含 L-谷氨酰胺,不含碳酸氢钠  

M199基础培养基,含 L-谷氨酰胺,含 HEPES,不含碳酸氢钠  

M199基础培养基,含 L-谷氨酰胺,含 HEPES,不含碳酸氢钠,含 Hank 盐  

M199 基础培养基,含 L-谷氨酰胺,不含酚红,不含碳酸氢钠  

M199 基础培养基,高压灭菌型,不含 L-谷氨酰胺,不含碳酸氢钠  

产品规格  

干粉(1L、10L 及 100L); 液体(500 ml)  配制方法  

干粉培养基的过滤配制  

  1. 将 1 升量的干粉在 950ml 细胞培养级纯净水中完全溶解  
  2. 加入 2 克碳酸氢钠,继续搅拌至完全溶解  
  3. 用 1N 盐酸或氢氧化钠调整到要求的 pH,将溶液定溶至 1000ml  
  4. 在超净台内用 0.22um 滤膜正压过滤  
  5. 将培养基在 2~8℃避光保存  

高压灭菌型的配制  

  1. 将 1 升量的高压灭菌型干粉在 900ml 细胞培养级纯净水中完全溶解  
  2. 将溶液 pH 调至 4.0,并将溶液定溶至 960ml  
  3. 在 121℃、15psi 高压消毒 5 分钟  
  4. 将培养基迅速取出,避免过久加热引起成份分解或液体蒸发减少  
  5. 待培养基冷却至室温后,无菌操作加入 29.3ml 的无菌 7.5%碳酸氢钠溶液,及 10ml 的无菌 200mM L-谷氨酰胺  
  6. 如有必要,用无菌的 1N 盐酸或氢氧化钠调整 pH  
  7. 将培养基在 2~8℃避光保存  

自备材料  

细胞培养级或注射级纯水  

7.5%碳酸氢钠溶液(无菌)  

200mM 谷氨酰胺溶液(无菌)  

1 N 盐酸溶液(无菌)  

1 N 氢氧化钠溶液(无菌)  

质检指标  

形状:淡黄色均匀粉末(干粉),澄清透明(液体)  

溶解:干粉按要求溶解后澄清透明  

pH 值:(加碳酸氢钠前)4.4-5.0(加碳酸氢钠后)(液体)7.4-8.0  

渗透压:(加碳酸氢钠前)230-270(加碳酸氢钠后)(液体)280-  320  

菌落:每克小于 100cfu (干粉),无菌(液体)  

细胞生长:正常(干粉及液体)  

储存及注意事项  

  1. 所有液体及干粉培养基应在 2~8℃避光保存,并在有效期内使用。  
  2. 不建议配制培养基浓缩液。部分氨基酸或盐会在高浓度下不溶解或沉淀。 
  3. 液体培养基的 pH 储存时会因为二氧化碳的逃逸而发生改变。建议尽量减少开瓶次数。  
  4. 灭菌后的液体培养基添加物应无菌,并在无菌操作下添加。  
  5. 干粉培养基吸湿性强,极易吸水变质。包装打开后应全部使用或剩余舍弃。  

注意:本产品于研发生产使用

 
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