犬骨桥素（OPN）elisa试剂盒使用说明书

更新时间：2013-01-04

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上海一基实业有限公司多年专业提供：ELISA试剂盒，标准品|对照品、生物试剂，抗体|抗原，培养基，血清、医药中间体、添加剂等科研试剂，质量保证，*，国内生物试剂的供应商之一，专业经销生物科学领域的，拥有齐全的生产和检测设备，实施严格的管理制度和完善的质量保证体系，为广大客户提供全面的和完善的售后服务。咨询!

Elisa kit规格：48孔配置/96孔配置

标准品稀释液：1.5ml×1瓶

酶标试剂：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）

【犬骨桥素（OPN）elisa试剂盒】本试剂仅供研究使用

计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

试剂盒组成：

封板膜:2片（48）/2片（96）

说明书:1份

密封袋:1个

标准品： 2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

酶标包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存

样品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

终止液: 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存

实验原理：

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中犬骨桥素（OPN）水平。用纯化的犬骨桥素（OPN）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入骨桥素（OPN），再与HRP标记的骨桥素（OPN）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的骨桥素（OPN）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中犬骨桥素（OPN）浓度。

目的：本试剂盒用于测定犬血清，血浆及相关液体样本中骨桥素（OPN）的含量。

服务承诺：

供货期：款到发货。工作时间内免费的技术咨询和指导。请为客户提供来样检测服务，zui大限度实验结果的有效性（免费代测）。

保存条件及有效期：

试剂盒保存：2-8℃| 有效期：6个月

【犬骨桥素（OPN）elisa试剂盒】样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。