病毒的鸡胚培养

更新时间：2012-07-04

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一、目的要求
掌握鸡胚尿囊腔接种培养新城疫病毒的操作技术.
二、器材
1.鸡胚应选用健康鸡群的受精蛋,接种鸡的鸡胚应无母源抗体,以免影响病毒在胚胎中的增殖.实验用的鸡胚多采用9—10日龄的活胚.
2.接种材料新城疫I系疫苗
3.各种器械孵卵器、照蛋箱、蛋架、打孔器、1ml结核菌素注射器、41/2号注射针头、镊子、3%碘酊、75%酒精棉球、铅笔、酒精灯、剪刀、眼科镊子、灭菌的疫苗瓶、灭菌滴管和固体石蜡等.
三、内容和方法
（一）接种前的准备
1.鸡胚的准备
本实验选择9—10日龄的鸡胚,在照蛋时以铅笔勾划出气室,于气室稍下方胚胎活跃而血管明显的区域中,在血管之间的间隙划上记号,作为接种部位；用0、 1%新洁尔灭把蛋壳搽洗干净并抹干,再以2%碘酊对接种部位进行消毒,用75%酒精再擦一遍,在接种定位出打孔,气室向上竖放于蛋架上.
2.病毒接种材料的准备
要分离培养的病毒材料应是无菌的,因此为达到材料无菌的目的,可在每ml接种物质中加青霉素和链霉素各100—500IU,置室温中1小时或冰箱中12—24小时处理.或经滤器除菌.
（二）接种
绒毛尿囊腔内注射：用6号针头的1ml注射器吸取新城疫病毒材料,针头从已打好的小孔中向鸡胚方向插入0.5—1cm,注入0.1ml （相当0、5羽份）,再加氧化锌胶布贴封,再加融化的固体石蜡封口,放回孵化箱中进行孵化,每天翻蛋两次,照视一次.24小时内死亡的舍去.
（三）收获
新城疫I系病毒材料,在接种24—48小时即可收获.收获前应将鸡胚置4度冰箱冷藏4小时或过夜,以免解剖时血管破裂.碘酒消毒蛋壳,用镊子去卵壳和尿囊膜,用吸头吸尿囊液于瓶内,可收集5-8ml,无菌检查,冰冻保存.