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技术文章

植物维生素E(VE)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书

点击次数:985 发布时间:2014-04-22

植物维生素E(VE)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书
上海一基实业有限公司多年专业提供:ELISA试剂盒,标准品|对照品、生物试剂,抗体|抗原,培养基,血清、医药中间体、添加剂等科研试剂,质量保证,价格优惠,国内生物试剂的供应商之一,专业经销生物科学领域的知名品牌,拥有齐全的生产和检测设备,实施严格的管理制度和完善的质量保证体系,为广大客户提供全面的和完善的售后服务。咨询!

本试剂仅供研究使用 
目的:本试剂盒用于测定植物血清,血浆及相关液体样本中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)的含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物维生素E(VE)水平。用纯化的植物维生素E(VE)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1),再与HRP标记的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物维生素E(VE)浓度。
试剂盒组成:
试剂盒组成    48孔配置    96孔配置     保存
说明书    1份    1份     
封板膜    2片(48)    2片(96)     
密封袋    1个    1个     
酶标包被板    1×48    1×96    2-8℃保存
标准品:2700ng/L    0.5ml×1瓶    0.5ml×1瓶    2-8℃保存
标准品稀释液    1.5ml×1瓶    1.5ml×1瓶    2-8℃保存
酶标试剂    3 ml×1瓶    6 ml×1瓶    2-8℃保存
样品稀释液    3 ml×1瓶    6 ml×1瓶    2-8℃保存
显色剂A液    3 ml×1瓶    6 ml×1瓶    2-8℃保存
显色剂B液    3 ml×1瓶    6 ml×1瓶    2-8℃保存
终止液    3ml×1瓶    6ml×1瓶    2-8℃保存
浓缩洗涤液    (20ml×20倍)×1瓶    (20ml×30倍)×1瓶    2-8℃保存
样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.        标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为1800ng/L,1200ng/L ,600ng/L,300ng/L, 150ng/L)。
2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.         配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.         温育:操作同3。
8.         洗涤:操作同5。
9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项:
1.  试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.  浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.  各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.  请每次测定的同时做标准曲线,zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.  底物请避光保存。
7.  严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.  所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.  本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围:
100ng/L -2000ng/L
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月

公司名称:上海一基实业有限公司
英文名称:shanghai yiji Industrial CO.,Ltd 
公司地址:上海市浦东新区张杨北路5972号2座
公司:http://www.yijisy.com
公司:yiji01@foxmail.com

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联系人:张嘉彬 联系电话:021-60526763  传真号码:021-50190009 公司网址:www.yijisy.com
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