胰蛋白酶解离法检测HBsAg-CIC

更新时间：2012-05-15

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用3．5％PEG选择性地沉淀血清中CIC，继之用胰蛋白酶消化沉淀物中的抗体蛋白，分离出抗原部分，用反向间接血凝法测定HBsAg滴度。与不加胰蛋白酶的对照管比较，如HBsAg滴度升高，则说明有HBsAg-CIC的存在。

1．试剂
①pH8．4硼酸盐缓冲液（BBS）：配制法同*节中PEG沉淀试验；
②7％PEG及3．5％PEG溶液：用BBS配制；
③10mg／mL胰蛋白酶溶液：用pH8．2巴比妥缓冲液配制。

2．操作步骤
（1）在测定管与对照管内务加待测血清0．2mL。
（2）两管各加pH8．4BBSl．8mL，将血清作1：10稀释。
（3）各加7％PEG 2mL，充分混匀后，4~C冰箱放置18h。
（4）在10％左右条件下2 500r／min离心20min，弃上清
（5）将沉淀物悬浮于4mL 3．5％PEG溶液中，2 500r／rain离心20min，弃上清。
（6）于测定管中加入0．2mL胰蛋白酶溶液，对照管加0．2mLBBS，混匀后置37％水浴30rain，其间振荡3—4次。取出后，立即置56％水浴5min。
（7）将测定管、对照管及未经处理的血清分别作系列倍比稀释，用反向间接血凝试验检测HBsAg滴度。

3．结果判断
①测定管HBsAg滴度在1／16以上，且滴度高于对照管1个稀释度以上者为HBsAg-CIC阳性；
②测定管与对照管HBsAg滴度相同，但其滴度高于血清游离HBsAg1个稀释度以上者也为HBsAg-CIC阳性。

4．临床意义胰蛋白酶解离法检测HBs-Ag-CIC简便而敏感，有助于确定乙肝病程中有无抗原特异性复合物形成，估计是否有可能形成肝外系统病变。