猪繁殖与呼吸综合征病原检测

诊断时zui重要的步骤是选择合适的样品，这样才能获得有用的实验室资料。一般来讲，从幼猪而非大猪中采集样品，因为在幼猪中的PRRSV的数量多，持续时间长。感染后4—6周能从乳猪、断奶仔猪或架子猪的血清中分离血清。病毒分离用的样品在采集后迅速冷藏或冻贮，因为PRRSV对病毒很敏感，在运输过程中必须注意温度不能升高，否则PRRSV易被灭活而不能进行病毒分离。此外，病毒对pH的稳定性范围很小，因此必须保证无菌环境，以避免细菌污染而导致pH改变。样品必须用绝缘和防漏的容器包装，有足够的冷冻剂，迅速递送到相关实验室对PRRS的病毒学诊断比较困难，这主要由于分离病毒需要选用猪肺泡巨噬细胞，这种细胞来自6～8周龄的猪，并且是无特定病原体猪（SPF）这种猪不是所有实验室都可以方便得到的。一般的传代细胞系对该病毒的易感性差，不能*替代肺泡巨噬细胞。某些猴肾细胞系（MARC-145）能较好的替代巨噬细胞，但不支持所有的分离物，尤其是对欧洲型毒株。

鉴定PRRSV的实验室技术还有免疫组化和免疫荧光方法，其中以肺和扁桃体组织用于检测效果较好，这两种方法比用病毒分离方法更迅速且无需细胞培养设施。免疫组化法可以对用福尔马林固定的组织块病毒鉴定，并能对病毒进行溯源性分析，但这两种方法的正确性受操作人员的技巧影响很大，再经病毒分离或PCR鉴定应用原位杂交法能检测和区别PRRS病毒北美洲基因型及欧洲株基因型，但它主要用于研究，并不适于实验室诊断。

反转录—聚合酶联反应（RT—PCR）以及套式PCR法检测病毒RNA的敏感性很高，当病毒分离困难时很有用，如测定精液或病毒因为自溶而部分降解。在猪的急性感染中，PCR与常规病毒分离同等敏感，在感染的康复阶段比病毒分离更为敏感。自动化的PCR试验不易发生污染，为诊断实验室提供敏感而特异的试验，而且费用大为下降。现在已广泛用于包括血清在内的多种组织的检测；现已发展了多种PCR诊断技术，其中嵌套式PCR比普通PCR提供了更高的敏感性，多重PCR可以用于区别北美型和欧洲型PRRS病毒分离株；现在更新的荧光定量RT—PCR技术也已经用于组织或血清样本中PRRSV的定性和定量检测。通过这些分子生物学的方法，我们可以在难以进行病毒分离的情况下快速准确地检测病原。zui近，开发的PCR产物进行限制性片段长度多态性分析的方法，可用于PRRS野毒株以及疫苗分离株的分子流行病学检测。