产品介绍 本试剂盒以血液为模板直接进行DNA扩增,扩增产物可直接点样电泳。该试剂盒中含有设计的Taq酶突变体,这些使它能够耐受全血样品中存在的抑制剂。在大多数抗凝剂存在下,包括肝素、柠檬酸和EDTA等,Taq酶依然扩增性能良好。由于其可以从血液直接进行扩增,免除了繁琐的DNA提取步骤,加快了工作流程,降低了污染的风险。 产品特点 1. 简便:无需事先对血液进行提纯,直接用血液为模板扩增目的基因; 2. 高效:多数抗凝剂存在条件下,*的抗抑制能力,能有效扩增杂质较多的模板。 产品用途 1.未加抗凝剂的血液样本; 2.添加了肝素、柠檬酸、EDTA 等抗凝剂的血液样本; 3.血液基因组扩增检测。 使用建议 1.使用时添加≤10%的全血为模板,若扩增不出目的条带, 酶量可加倍。加上血液后将管中各组分轻轻混匀。 2.2mM Mg2+可以满足绝大多数 PCR 扩增,对于某些 PCR, 为了保证较好的扩增,可调 节为 2-5mM。 保存温度 -20℃保存。 产品组分 产品组成 | 体积 | 2 × Direct Blood PCR Buffer (with Mg2+) | 1.25ml | dNTPs(各 10mM) | 100μl | Direct Taq DNA 聚合酶(400U) | 100μl |
常用反应体系 (25μl): 2 × Direct Blood PCR Buffer (with Mg2+*) | 10μl | 上游引物 | 0.2-1.0 μM(终浓度) | 下游引物 | 0.2-1.0 μM (终浓度) | dNTPs(各10mM) | 1μl | 全血 | 0.1-2.5μl | Direct Taq DNA 聚合酶(400U) | 1μl | ddH2O | 至 25 μl |
*Mg2+终浓度为 3.5mM 常用PCR设置 当扩增片段<3K | 当扩增片≥(推荐引物长度≥30bp) | 94℃, 1 分钟 30 秒 94℃,20 秒 55-60℃,20 秒 30-40循环 72℃,1kb/60 秒 72℃ 5 分钟 4℃ 保温 | 94℃, 5 分钟 94℃,15 秒 30-40循环 68℃,1kb/60 秒 72℃ 5 分钟 4℃ 保温 |
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