主营:实验试剂;Elisa试剂盒;试剂盒;培养基;血清;抗体;生物试剂;实验室仪器等;氨基酸类;低温恒温槽;雪花制冰机;恒温油槽;等产品的国内一流服务商。欢迎您来电洽谈。电话:021-60526763
产品搜索:
 
|
|
|
|
|
|
|
|
硫酸多粘菌素B/多胜菌素乙
硫酸多粘菌素B/多胜菌素乙
氯霉素HE10001
氯霉素HE10001
L-茶氨酸3081-61-6
L-茶氨酸3081-61-6
1-萘甲胺118-31-0
1-萘甲胺118-31-0
多粘菌素E/硫酸粘菌素
多粘菌素E/硫酸粘菌素
不锈蒸馏水器
不锈蒸馏水器
七水硫酸镁/铁精矿/Magnesium sulfate heptahydrate
七水硫酸镁/铁精矿/Magnesium sulfate heptahydrate
生化培养箱
生化培养箱
二聚氰/二聚氰胺/氰基胍/二氰二氨/Dicyandiamide
二聚氰/二聚氰胺/氰基胍/二氰二氨/Dicyandiamide
乳化剂S-80/斯盘80/(Z)-单-9-十八烯酸脱水山梨醇酯/Span 80
乳化剂S-80/斯盘80/(Z)-单-9-十八烯酸脱水山梨醇酯/Span 80
山梨糖醇酐硬脂酸酯/司本60/乳化剂S-60/斯盘60/山梨醇酐单硬脂酸酯/清凉茶醇一硬脂酸酯/Sp
山梨糖醇酐硬脂酸酯/司本60/乳化剂S-60/斯盘60/山梨醇酐单硬脂酸酯/清凉茶醇一硬脂酸酯/Sp
CG-50弱酸型阳离子交换树脂/Amberlite CG-50
CG-50弱酸型阳离子交换树脂/Amberlite CG-50
生化试剂
电热套
分析检测仪器
万用可调电炉/封闭式电炉
混合器系列
电阻炉系列
蒸馏水器系列
电热板系列
匀浆机系列
离心机系列
* 振荡器系列
培养箱系列
磁力搅拌器
超声波清洗机
干燥箱
旋转蒸发器
糖度计,折光仪
冷冻干燥机
层析冷柜
低温恒温槽
2-乙烯基吡啶100-69-6质检报告COA
虫草素标准品73-03-0质检报告COA
1,1,2-三氯三氟乙烷76-13-1检验报告COA
4-乙酰氧基苯乙烯CAS:2628-16-2检测报告
二甲苯麝香CAS号:81-15-2质检报告COA
上海一基实业有限公司 >>> 资料下载
资料下载

瞬时转染分析法

点击次数:1217 发布时间:2012/6/19
提 供 商: 上海一基实业有限公司 资料大小: JPG
图片类型: JPG 下载次数: 412
资料类型: JPG 浏览次数: 1217
相关产品:
详细介绍: 文件下载    图片下载    

1.瞬时转染分析法
目前有很多功能性分析方法用于研究转录调控,zui常用的方法是瞬时转染分析法.该方法是通过一定的转染程序将含目的调控区的质粒导人培养细胞.在典型情况下,调控区调控“报告基因”的转录.报告基因是在mRNA和蛋白质的水平上都易于被正确检测到的基因 .产生的质粒在培养细胞中转录后,在特定时刻测定从报告基因上合成的mRNA或蛋白质,以评价调控区的活性.人们将这种分析方法称为瞬时转染分析,因为此时质粒仍然以附加的形式存在,很少整合进宿主基因组.因此,mRNA或蛋白质产物必须在短时间内(1~3天)进行测定,否则随着细胞的生长和分裂,质粒会被降解或稀释.虽然瞬时转染分析法具有多种局限性,但该方法仍然常用于对顺式作用DNA序列和调控基因表达的反式因子进行初步分析.
快捷、简单,易于对结果定量,因此成为启动子功能分析的方法.
也有两个主要局限性:首先在被转染的细胞中,质粒的人工构象和拷贝数可能会导致特异性调控元件失活或具有特异功能;其次,不能用于检测那些需诱导或分化时间超过48~72小时时间期限的研究.
2.稳定转染分析法
对在瞬时转染分析中未表现出预期活性的调控区,或依赖于特异染色质结构的调控区,可以采用稳定转染分析法,即将含有报告基因的目的基因调控质粒稳定地整合进基因组.此外,还需将由组成型启动子控制的抗药性基因(如显性选择标记基因)稳定地整合进基因组进行分析.抗药性基因可以和报告基因在同一个质粒上,也可以在不同质粒上.将含有报告基因和抗药性基因的质粒转染培养细胞,培养基中加入能杀死不稳定表达抗药性基因细胞的药物,部分质粒被稳定地整合到染色体上.多数情况下,在细胞中多个质粒分子彼此相连形成多联体,多联体随机整合到多联体基因组中,因此每个被稳定转染的细胞都具有独特的整合位点.然后通过测定被稳定转染细胞中报道基因的活性,来确定目的调控区的活性.
稳定转染分析方法的主要优点是,进行分析的调控区及报道基因通常位于近乎天然的染色质构象中,具有近乎天然的拷贝数,这些特点使调控区能更地模拟正常功能.在稳定转染分析中,因对转染的细胞进行了选择性扩增,所以克服子瞬转细胞吸收DNA少的缺点.稳定转染分析的另一个特点是对随后的转录分析没有时间限制.因此,稳定转染对所需时间相对较长的研究非常有用.稳定转染分析的缺点是因为要进行药物筛选和细胞扩增,因此操作难度较大,需要的时间较长.
3.体外转录分析法
体外转录分析法适用于难以转染的细胞、在转染分析中不能产生具有可检测活性的启动子或进行基因调控更研究.该分析方法的一个显著特点是不需要确定有效的转染条件,而且可以在体外反应体系中加入抗体,加入或去除某些转录因子,以评价特定转录因子的功能.
4.转基因分析法
转基因分析法是将报告基因和目的调控区稳定地随机整合到动物基因组中,以检测天然的前后序列中调控区的活性.该分析方法能用于确认转染分析中鉴定的特定调控区或调控元件.
5.同源重组分析法
同源重组分析法很少用,仅在培养细胞或动物基因组中对内源基因进行操作.

 

[ 打印 ] [ 返回顶部 ] [ 关闭
 
公司名称:上海一基实业有限公司 公司地址:上海浦东新区张杨北路5972号 邮政编码:200137 
联系人:张嘉彬 联系电话:021-60526763  传真号码:021-50190009 公司网址:www.yijisy.com
网站访问统计:271293 网站ICP备案号:沪ICP备17026694号-4  GoogleSiteMap  网后台登录地址
主营:实验试剂;Elisa试剂盒;试剂盒;培养基;血清;抗体;生物试剂;实验室仪器等;氨基酸类;低温恒温槽;雪花制冰机;恒温油槽; 等产品

化工仪器网

中级会员

中级会员

9

推荐收藏该企业网站